如何正確使用qPCR封板膜?

一、qPCR封板膜的正確使用方法

準(zhǔn)備工作‌

從無酶自封袋中取出單張封板膜，避免手直接接觸粘合面‌。

若使用帶標(biāo)簽的封板膜，需沿切線緩慢剝離襯紙，減少卷曲風(fēng)險(xiǎn)‌。

貼合步驟‌

將封板膜一端對(duì)齊孔板邊緣，逐步貼合并拉緊另一端，確保無褶皺‌。

使用壓膜板(或光滑卡片)以“十字交叉”方式刮壓：先水平方向兩次，再垂直方向兩次，確保孔間和邊緣均密封‌。

密封檢查‌

確認(rèn)封板膜與孔板緊密貼合，無液體殘留或氣泡，邊緣無翹起‌。

密封后靜置10分鐘，使粘合劑充分固化‌。

二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

避免漏液‌：96孔板可能存在公差變形，需多次刮壓確保密封性‌。

熒光兼容性‌：選擇高透光率(≥86%)的聚酯纖維或聚烯烴材質(zhì)，減少信號(hào)干擾‌。

溫度耐受‌：確保封板膜耐熱性覆蓋qPCR循環(huán)溫度(如-20℃~120℃)‌。

三、常見問題解決

信號(hào)弱‌：檢查封板膜是否與qPCR儀光路匹配(如白色耗材增強(qiáng)反射)‌。

蒸發(fā)率高‌：優(yōu)先選擇壓敏型封板膜，蒸發(fā)率需≤3%(尤其小體系樣本)‌。

通過規(guī)范操作和適配性選擇，可顯著提升qPCR結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性‌。

注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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